細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑使用問(wèn)答
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1.谷氨酰胺使用方法是什么？
答：谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中單獨(dú)配制，置-20℃
冰箱中保存，用前加入培養(yǎng)液中。
2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩(wěn)定？
答：碳酸氫鈉白色粉末，或不透明單斜晶系細(xì)微結(jié)晶。比重2.159。無(wú)臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微堿性，受熱易分解，在65℃以上迅速分解，在270℃時(shí)*失去二氧化碳，在干燥空氣中無(wú)變化，在潮濕空氣中緩慢分解。
3.培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因有哪些？其解決辦法有哪些？
答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或已被破壞；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)找出可能的原因。
解決辦法：增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度；讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補(bǔ)加谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子等；用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在-5℃到-20℃；培養(yǎng)液需在2－8℃避光保存；含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，并在2周內(nèi)用完；分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。
4.L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？
答：L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)非常重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。
5.細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎？
答：不見(jiàn)得！因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱膒H、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++,Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下，pH8.0,溫度37oC其作用能力zui強(qiáng)。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液濃度為：
(1)0.05％胰蛋白酶＋0.02％EDTA；
(2)0.25%胰蛋白酶
多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA這種消化液。
6.二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么？
答：二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來(lái)自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。
7.GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定？
答：GlutaMAX-I即谷丙氨酸二肽，是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有zui小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解
8.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？
答：丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。
9.Hank′s平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別？
答：HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s(2.2g/L)中比在Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2中，溶液會(huì)變堿，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks′液就可以了。
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